牛栏山酒厂，清香大曲及酒醅中地衣芽孢杆菌的分离鉴定（二）
五粮液集团入驻本商城！ 茅台集团入驻本商城！ 剑南春集团入驻本商城！ 金六福酒业入驻本商城！ 宝丰酒业入驻本商城！
过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解水和氧。将芽孢杆菌接种于肉汁培养基斜面上，适温培养18-24h。取干净的载玻片，在上面滴1滴3-5％的H2O2，挑取1环培养18-24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，则为过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。也可将过氧化氢溶液直接加到菌种斜面上，观察气泡的产生。
2.2.2淀粉酶实验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为无色糊精等小分子，或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不变蓝色。
培养基：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2％的可溶性淀粉，分装三角瓶，121℃20min灭菌备用。卢戈氏(Lugol)碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，混匀，定容。
将灭菌后放入培养基冷却到50℃左右，倒成平板，凝固后，取18-24h的纯培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4d，形成菌落后，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板成蓝色。如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，实验为阳性，否则为阴性。透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。
2.2.3纤维素酶实验
采用刚果红染色法，如果有刚果红存在，刚果红可以与纤维素结合成红色螯合物，培养基颜色为红色。如果培养基中有能够产纤维素酶的细菌，将纤维素分解，不能形成螯合物，在菌落周围形成透明圈。这样可以鉴定产纤维素酶的细菌。
培养基的配制：CMC-Na5-10g，酵母膏1g，KH2PO40.25g，琼脂15g，将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000ml，加入5ml10mg/ml的刚果红溶液，121℃，灭菌20min，冷却倒平板，凝固后待用。取18-24h的培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4d，形成菌落后，观察产生透明圈情况，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈，否则为阴性。
2.2.4明胶液化实验
明胶是一种动物性蛋白，明胶的水解是由于有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。明胶培养基本身低于20℃凝固，高于24℃则自行液化。明胶分解后，其分子变小，虽在低于20℃的温度下也不再凝固。培养基：蛋白胨5g，明胶120g，蒸馏水1000ml，调节pH7.2-7.4，分装试管，培养基高度约4-5cm，115℃20min灭菌。
挑取18-24h培养物，以穿刺法接种于试管中央，于20-22℃培养。每天观察结果，液化为阳性，否则为阴性。
2.3需厌氧实验
在培养基中加入还原剂，如巯基醋酸钠和甲醛合次硫酸钠等，以除去培养基中的氧气或氧化型物质，使厌氧菌能在有氧情况下生长。培养基：酪素水解物20g，NaC15g，巯基醋酸钠HS?CH2COONa2g，甲醛合次硫酸钠HOCH2?SO2Na1g，琼脂15g，蒸馏水1000ml，调节pH7.2，分装试管121℃灭菌20min，培养基不摆斜面。
用1环肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中，必须穿刺到管底。30℃培养3-7d观察结果。如细菌在琼脂柱表面上生长者为好氧菌，如沿着穿刺线生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌。
2.4乙酰甲基甲醇实验(V.P实验)
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V.P阳性反应。培养基：蛋[FS:PAGE]白胨5g，葡萄糖5g，NaC15g，蒸馏水1000ml。调节pH7.0-7.2，分装试管，每管约装4-5ml，115℃灭菌20min。试剂：40％NaOH（或KOH），肌酸。
接种于上述培养液中，适温培养4-6d。如为阴性，可适当延长培养时间。取培养液（约2ml）和等量的40％NaOH相混合，加少量（约0.5-1.0mg）肌酸，充分振荡2-5min，如培养液出现红色即为阳性。有时需放置更长时间或在热水中稍加热，以加速反应进行。